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生物素標記反應原理
點擊次數:126 更新時間:2025-06-25

生物素標記

生物素標記反應原理:
 NH2-Reactive Biotin專一的與伯胺反應(N-末端及賴氨酸殘基側鏈)形成穩定的酰胺鍵

生物素標記.png

 

操作過程:
實驗前準備
仔細閱讀使用說明書。
計算待使用NH2-Reactive Biotin的量。

1.   提前20 min從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的NH2- Reactive Biotin繼續放置冰箱中)。

2.   溶解NH2-Reactive Biotin:加入30 μL DMFNH2-Reactive Biotin瓶中,靜置10 min,待其充分溶解,此時生物素的濃度為10 mM



操作步驟:(本操作步驟按照1 mg的量進行標記)

1.   1 mg待標記抗體于Filtration tube中,并加入相應體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL12,000 × g離心10 min。(注:①Filtration tube的最大體積為0.5 mL待標記抗體濃度低時,可先超濾離心一次。)

2.   加入13.3 μL NH2-Reactive Biotin 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使抗體的終濃度為2 mg/mL,并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育30 min

3.   12,000× g離心10 min

4.   加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使終體積為0.5 mL,并輕輕吹打混勻,12,000× g離心10 min。并重復操作一次。

5.   0.2 mL Labeling BufferFiltration tube中,輕輕吹打。將濾芯倒轉放置于另一個離心管中,6,000× g離心10 min

6.   收集離心管中的溶液,即為生物素標記的抗體。



注意事項:

1.   本試劑盒也可標記其它含有氨基(NH2-)的抗原、HRP、多肽,具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定。

2.   DMF要密封干燥保存,使用完立即用封口膜封緊。

3.   操作步驟5中,可用Labeling Buffer作為回收標記抗體的緩沖液,也可使用其它任何緩沖液或保護劑。

4.   本試劑盒未開封前的有效期為一年,請在有效期內使用。

5.   本試劑盒提供的為10 kDaFiltration tube,標記抗原或多肽請注意分子量的大小。

6.   在步驟2中,標記其它抗體時,我們應先控制抗體的終濃度為2 mg/mL,然后再根據抗體的量計算應加入NH2-Reactive Biotin的體積。

 

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實驗技術服務:

 


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